Akadēmiskais centrs
2023. gada 30-31. martā Latvijas Universitātes Dabas mājā norisinājās projekta partneru tikšanās, kur katrs projekta partneris prezentēja projekta progresu un tālākās darbības saistībā ar projektu.
Tika secināts, ka ir panākts būtisks progress WP1, WP2 un WP3 izpildē. Iepriekšējā projekta periodā sasniegts būtisks progress augu in vitro materiāla iegūšanā, kas ir kritiska tālākam sekmīgam pielietojumam genoma editēšanā. Visām projektā pētītām L.perenne līnijām ir panākta kalloģenēze un kallusu kultūras tiek uzturētas tālākam pielietojumam. Ir izveidots protoplastu kultūru iegūšanas protokols, kas ļauj iegūt tālākai transformācijai nepieciešamo protoplastu skaitu (> 10^5/ml). In vitro dzinumu kultūru apstrāde ar antibiotikām ir ļāvusi atbrīvoties no bakteriālā piesārņojuma, tomēr būtiskas grūtības in vitro dzinumu kultūru uzturēšanai sagādā endofītisko sēņu piesārņojums. Šobrīd tiek veikti eksperimenti ar cycloheksimīda izmantošanu sēņu infekcijas eliminēšanai.
Balstoties uz literatūras analīzi, ir izvēlēti vairāki sausuma un sala izturībā iesaistīti gēni tālākam darbam pie genoma rediģētu augu iegūšanas WP1 un WP3. Aprīlī paredzēts uzsākt mērķa gēnu sekvencēšanu sausuma un sasalšanas izturīgos genotipos izmantojot PacBio HiFi garo nolasījumu sekvencēšanas tehnoloģiju, kas ļauj izšķirt haplotipus.Trim no šiem gēniem izveidotas vienu gRNA saturošas plazmīdu konstrukcijas un darbs pie multi-gRNA plazmīdu konstruktiem turpinās. Tālākam pielietojumam kallusu transformācijai plānots atlasīt sekmīgākās gRNA, izmantojot protoplastu kultūras.
Ir pabeigts darbs pie sala-izturības noteikšanas eksperimentiem WP2, kas ļāva iegūt RNS no augu līniju paraugkopas, kurā pārstāvēta plaša spektra sala-izturība. Izdalītā RNS tiks sekvencēta un iegūtie rezultāti ļaus identificēt ar sala-izturību saistīto mērķa gēnu ekspresijas izmaiņas stresa apstākļos. Sausuma izturības eksperimenti tiks veikti 2023.g. aprīlī un tie ietvers gan vairāku fizioloģisku parametru izvērtējumu, gan augu materiāla ievākšanu RNS izdalīšanai un turpmākai sekvencēšanai sausuma izturībā iesaistīto gēnu ekspresijas izmaiņu noteikšanai.
Nākamā projekta tiešsaites sanāksme plānota 2023. g. jūnijā, bet nākamā klātienes tikšanās un publiskā apspriede notiks Lietuvā 2023. g. oktobrī.
Prezentācijas:
